Для онкологов
ПРЕИМУЩЕСТВА КОНКУРЕНТНОГО АНАЛИЗА НА БАЗЕ НАШИХ НАУЧНЫХ МЕТОДОВ

До сих пор проводимые исследования были клоногенетическими, среди прочих такие как: АТР-ТСА, МТТ и SRB. Эти исследования ограничены использованием образца ткани или в случае МТТ материалом опухолевого секрета. Эти исследования также основываются только на количественным анализом живых клеток с использованием косвенных параметров. Например:

        Исследование SRB использует сульфорадомин В, который связывает весь протеин клеток и при помощи колорометрического метода возможно находить число живых клеток в культуре раковой клетки ( это там, куда мы помещаем химикотерапевтическое лекарство в среду роста).
        В случае с МТТ, исследование основывается на тестирование тетразолина, который зависит от количества NADP NADPH.
        И наконец, исследование АТР-ТСА, которое измеряет производство АТР с использованием флюрометрического и фотометрического метода ( что, в свою очередь, измеряет катализ люцефирина энзимом люцефираза), требующего завершения митохондриального АТР.
К сожалению эти методы имеют большие недостатки и как следствие не имеют широкого клинического использования. Особенно:

        Исследование МТТ подвергается влиянию внутриклеточной концентрации и глюкозы и рН. Это измерение зависит от времени и временная точка должна быть очень чёткой.
        В случае с SRB , исследование легче и занимает меньше времени, чем МТТ, однако, оно основывается на том факте, что сульфародамин соединяет внутриклеточный протеин с последней амино-точкой и это является косвенным фактором жизнеспособности клеток. Также, исследование SRB, как все другие химико-чувствительные исследования, не может быстро и оперативно предоставить информации о развитии механизмов сопротивления ни информацию о метастатической способности опухоли через нео-ангиогенезис.
        Эти исследования (АТР-ТСА, МТТ, SRB, Disc и другие) не могут предсказывать чувствительность сопротивления за короткие временные рамки (клоногенетическое исследование требует примерно 20 дней на завершение). Выше упомянутые исследования дают только минимальный объём информации по злокачественному фенотипу рака и не предлагают решений по избежанию или направлению в обратную сторону механизмов сопротивления. Дополнительно, эти анализы не могут предсказать уровни токсичности, возникающие при использовании химико-терапевтических лекарств, таких как: 5-FU и не даёт какой-либо информации о таких лекарствах ( т.е. категорию биологических модификаторов).
Remission Labs предоставляет услуги, которые перекрывают выше перечисленные недостатки при помощи использования микро-схемного чимико-чувствительного теста (CST) , что даёт гарантию использования не только образца ткани из опухоли или материала опухолевого секрета, но и также переферической (всей) крови у больных на IV стадии рака. Используя образец всей крови мы выполняем:

         Изолирование циркулирующих раковых клеток с использованием градиентного раствора и мембран с порами.
         Продолжение негативный отбор с использованием цитоспина и анти CD+45 ( эти антитела связываются гематологическими клетками и отделяют их от эпителиальных злокачественных клетка).
         продолжения положительного отбора с использованием антитела EpCam , которое соединяет и изолирует через цитоспин эпительную первоначальную клетку (раковую клетку).
         Идентификацию изолированных злокачественных клеток с использованием набора определения иммортализации из Oncogen.
         Развитие многих клеточных культур в 96 ячейках и в каждую ячейку добавлять культурную среду отличную от химико-терапевтического лекарства.
         Затем каждые 24 часа произведение экстракта каждого маленького образца культуры и изолирование mРНК.
         Произведение сДНК при наличии RT-PCR.
         Следование микро-схемной гибридизации и колориметрическому микро-схемному анализу (рис 1) с использованием образцов, ниже перечисленных ген:
TS, DHFR, табулин a and b, фактор транскрипции табулина а. топоизомираза I and II (a&b), SHMT, DPD, TP, p27, p53, ДНК метилтрансфераза, О6 ацетилтрансфераза, MRP (I&II), LRP, GST, VEGF, PDGF, EGF, TGFb, IGF, MMP9, нуклеотид редактаза, COX-2, 5-LOX, SS-r, c-erb-B2.

Чтобы быть более точным, тимидилат синтаза и DHFR известные гены, производящин энзимы очень критичные для фолиевой дорожки. Данная дорожка является единственным биохимическим способом для клеток производить тимидин нуклеотид , который в свою очередь необходим для удвоения ДНК и клеточного деления. Когда раковые клетки сопротивляются анти-фолиатам таким как: метотрексат и 5флюрорасил, они они перемоделируют эти гены до точки, когда количество энзимов становится таким большим, что ингибитор ahs находится в очень большой концентрации и это не позволяет ингибитору связываться с ними. В добавок мы должны упомянуть, что особенно в случае с 5-FU мы тестируем стимуляцию DPD and TP, что катализирует трансформацию 5-FU в 5 FUMP - активный продукт. Если дейтельность этих генов нерегулярна, 5FU не может хорошо трансформироваться и токсины также становятся очень сильными.
Когда это подходит к перекрёстному связыванию ДНК и реорганизации энзимов, топоизомераза I and II и все их изоформы производят энзимы , которые становятся целями для антраксициклина, камтотецина, эпиподофилина и соединений адриамицина. Эти энзимы критичны на фазе S во время клеточного цикла ( при удвоении ДНК) и восстановительных механизмах ДНК. К сожалению, механизмы сопротивления для выше перечисленных ингибиторов зависят только от сверх-симуляции р гликопротеиновых насосов MDR1, MRP and LRP в ткани лёгкого.

Гены, производящие табулин a and b и все их изоформы являются критичными для формирования ядерной оси. Алкалоиды Винка , связанные с табулином В, препятствуют формированию оси и месту клеточного цикла на стадии метафазы. Таксаны , связанные с регуляторами табулина a и b должны делать ядерную ось такой устойчивой, что де-полимеризация становится невозможной. С этим механизмом таксаны останавливают клеточный цикл на телофазовой стадии. К сожалению и алкалоиды Винка и таксаны становятся целями мембрановых насосов MDR1, MRP1 и LRP или мутаций, особенно в генах табулина b, делая молекулу неспособной связываться с ингибиторами.

Дополнительно ДНК метилтрансфераза, О6 ацилтрансфераза и демитилаза ДНК являются генами, вовлеченными в метилацию ДНК, которая регулирует наматывание и разматывание генов. Особенно в раковых клетках, гиперметилация ДНК является одним из механизмов сопротивления и регуляции ракового фенотипа и его поведения. Также эти гены вовлечены в механизм подавления алкилирующих лекарств.

В конце концов гены VEGF, FGF и PDGF вовлечены в процедуру ангиогенеза. Ангиогенез необходим для метастатических процессов. Гены TGF, EGF и IGF и соматостатин (соматомедин) сверх стимулируются в раковых клетках, что провоцирует снова и снова определенные рецепторы мембраны, которые также сверх-стимулируются, что в свою очередь создаёт механизм позитивной обратной связи роста клетки и митоза без окончания начала иммортализации. Экосаноиды также вовлечены как факторы роста или факторы транскрипции в карциногенез и в раковые фенотипы клетки. Частично. Сверх-стимуляция чиклоксигеназа 2 и 5 липоксогеназа критична для выше указанного процесса. Исследования уже показали, что угнетение этих энзимов (коксибов или аналогов триена) вевдёт ремиссии роста раковой клетки.

Фармацевтические субстанции используемые и вводимые в культурную среду:

        оксалиплатин
        цисплатин
        циклофосфамид
        ифосфамид
        трофосфамид
        треосульфан
        мельфалан
        CCNU
        BCNU
        ACNU
        митомицин
        прокарбазин
        дакарбазин
        блеомицин
        темозоламид
        естрамустин
        доксорубицин
        епирубицин
        даунорубицин
        дактиномецин
        иринотекан
        топотекан
        идарубицин
        этопозид
        митоксандрон
        паклитаксел
        доцетаксел
        винкристин
        винбластин
        винорелбин
        тауролидин
        5флюрорасил
        урацилтегафур
        ралтитрекст
        флоксуридин
        капецитабин
        пеметрекст
Мы также проверяем био-наличие клеток с использованием окрашевающей субстанции (Голубой Трипан 0.4%) и делаем микро-фото.Голубой Трипан является наиболее надёжным методом измерения жизнеспособности клеточной культуры. Голубой Трипан является уникальным аналогом аминоптерина, который может в фолиевом цикле ( жимическая дорожка, которая критична и сверхактивна в раковых клетках). Благодаря этому факту, этот аминоптерин не может проходить свозь мембрану клетки, он окрашивает её в голубой свет без окрашивания внутреннюю область клетки. В клетках Дебрис (мертвых клетках) Трипан может проходить сквозь поврежденную мембрану и он может окрасить всё тело клетки в ярко синий свет. Из 6 образцов, которые мы берём каждые 6 дней , мы способны строить график жизнеспособности на каждое химикотерапевтическое лекарство. Эта процедура выполняется один раз каждые 24 часа в течении 6 дней. Данные микро-схемы так же как и микрофотографии каждого случая отсылаются в наши лаборатории для анализа и оценки на компьютерах.

Также мы тестируем 50 самых популярных субстанций, убивающих рак. Мы делаем экстракт активных компонентов и затем тестируем их на раке больных пациентов.*

Имея на руках вышеперечисленные данные, мы составляем безопасный профиль и генетический и цитологический для неоплазматических клеток на каждый случай. В результате, мы способны сделать вывод , к каким особым фармацевтическим субстанциям чувствительны клетки и к каким есть сопротивление, быстро и безопасно. Также мы тестируем 50 самых популярных субстанций, убивающих рак. Мы делаем экстракт активных компонентов и затем тестируем их на раке больных пациентов.*


* Для более подробной информации смотри анализ образца.